Agar Triplice Acucar Ferro (Tsi) Frasco 500g AG-5044 Himedia

AGAR TRIPLICE ACUCAR FERRO (TSI) FRASCO 500G AG-5044 HIMEDIA

Composição**

• Ingredientes Gms / Litro
• Peptona 10.000
• Tryptone 10.000
• Extrato de levedura 3.000
• HM Peptona B # 3.000
• Lactose 10.000
• Sacarose 10.000
• Dextrose (Glicose) 1.000
• Cloreto de sódio 5.000
• Sulfato ferroso 0,200
• Tiossulfato de sódio 0,300
• Vermelho de fenol 0,024
• Ágar 12.000
• PH final (a 25 ° C) 7,4 ± 0,2

** Fórmula ajustada, padronizada para atender aos parâmetros de desempenho
# Equivalente ao extrato de carne bovina

Instruções
Suspenda 64,52 gramas em 1000 ml de água destilada. Aqueça até ferver para dissolver completamente o meio. Misture bem e distribua em tubos de ensaio. Esterilize em autoclave a pressão de 15 libras (121 ° C) por 15 minutos. Permitir que o meio seja ajustado em forma inclinada com cerca de 1 polegada de comprimento.
Nota: Para obter melhores resultados, o meio pode ser esterilizado em autoclave a uma pressão de 10 libras (115 ° C) por 15 minutos.

Princípio e Interpretação
O Ágar triplo de ferro-açúcar foi proposto originalmente por Sulkin e Willett (1) e modificado por Hajna (2) para identificar Enterobacteriaceae. Este meio está em conformidade com a recomendação da APHA, para o exame de carnes e alimentos (3), para o exame de leite e produtos lácteos (4) e para o teste de limite microbiano para confirmar a presença de Salmonellae (5, 6) e na identificação de bacilos gram-negativos (6, 7).
Triptona, peptona, extrato de levedura e peptona HM B fornecem compostos nitrogenados, enxofre, oligoelementos e complexo de vitamina B etc. O cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico. A lactose, sacarose e dextrose são os carboidratos fermentáveis. Tiossulfato de sódio e íons ferrosos formam o sistema indicador de H2S. Vermelho de fenol é o pH indicador. Organismos que fermentam glicose produzem uma variedade de ácidos, mudando a cor do meio de vermelho para amarelo.
Uma quantidade maior de ácidos é liberada na bunda (fermentação) do que na inclinação (respiração). Bactérias em crescimento também formam alcalinos produtos da descarboxilação oxidativa da peptona e esses produtos alcalinos neutralizam grandes quantidades de ácido presente no fundo. Assim, a aparência de uma inclinação alcalina (vermelha) e de um traseiro ácido (amarelo) após a incubação indica que o organismo é um fermentador de glicose, mas é incapaz de fermentar lactose e / ou sacarose. Bactérias que fermentam lactose ou a sacarose (ou ambas), além da glicose, produz grandes quantidades de ácido, não permitindo reversão do pH naquela região e, portanto, as bactérias exibem uma inclinação e uma extremidade ácidas. A produção de gás (CO2) é detectada pela presença de rachaduras ou bolhas no médio, quando o gás acumulado escapo. O tiossulfato é reduzido a sulfeto de hidrogênio por várias espécies de bactérias e o H2S combina-se com íons férricos de sais férricos para produzir o precipitado preto insolúvel do sulfeto ferroso. Redução de o tiossulfato procede apenas em um ambiente ácido e geralmente ocorre escurecimento no fundo do tubo. Ferro Triplo com Açúcar O ágar deve ser utilizado em paralelo com o ágar de Uréia / caldo (M112 / M111) para distinguir entre Salmonella e Proteus espécies. As reações podem ser resumidas da seguinte forma:
Inclinação alcalina / glicose somente ácido fermentada
Inclinação ácida / butt-glucose e sacarose ácidas fermentadas ou glicose e lactose fermentadas ou todos os três açúcares, glicose, lactose e sacarose fermentada.
Bolhas ou fissuras na produção de gás presente
Produção de gás H2S presente em precipitado preto

Tipo de amostra
Isolado bacteriano puro

Coleta e manuseio de amostras:
Siga técnicas apropriadas para coleta de amostras, processamento de acordo com as diretrizes (8,9)
Após o uso, os materiais contaminados devem ser esterilizados em autoclave antes de serem descartados.

Aviso e precauções:
Leia o rótulo antes de abrir o recipiente. Use luvas de proteção / vestuário de proteção / proteção ocular / proteção facial. Siga as boas práticas de laboratório microbiológico ao manusear amostras e cultura. Precauções padrão conforme diretrizes estabelecidas devem ser seguidas durante o manuseio de amostras clínicas. As diretrizes de segurança podem ser consultadas nas fichas de dados de segurança individuais

Limitações:
1.Alguns membros das Enterobacteriaceae e H2S produtoras de Salmonella podem não ser H2S positivos no ágar ETI. Algumas bactérias podem mostrar produção de H2S no ágar de ferro Kligler, mas não no ágar ETI. Isso pode acontecer porque a utilização de sacarose no TSI Agar suprime a via enzimática que resulta na produção de H2S.

Desempenho e Avaliação
O desempenho do meio é esperado quando usado de acordo com a direção na etiqueta dentro da temperatura recomendada.

Controle de qualidade
Aparência: Pó de fluxo livre homogêneo amarelo claro a rosa
Gelificação: Firme, comparável com gel de ágar a 1,2%.
Cor e clareza do meio preparado: Gel vermelho rosado, de cor clara a ligeiramente opalescente, forma-se em tubos como inclinações.
Reação: Reação de solução aquosa a 6,45% p / v a 25 ° C. pH: 7,4 ± 0,2
Ph: 7,20-7,60

Resposta cultural
M021: Características culturais observadas após uma incubação a 35-37 ° C por 18-24 horas.

Resposta Cultural

Organismo:Citrobacter freundii ATCC 8090
Inoculação:50-100
Crescimento:Exuberante
Inclinação: Reação Ácida, amarelado no meio
Fundo:Reação Ácida, amarelado no meio
Gas:Reação Positiva
H2S: Positivo, escurecimento do meio

Organismo: Klebisiella aerogenes ATCC 13048 (00175*)
Inoculação:50-100
Crescimento:Exuberante
Inclinação: Reação Ácida, amarelado no meio
Fundo:Reação Ácida, amarelado no meio
Gas:Reação Positiva
H2S: Negativo, sem escurecimento do meio

Organismo:Escherichia coli ATCC 25922 (00013*)
Inoculação:50-100
Crescimento:Exuberante
Inclinação: Reação Ácida, amarelado no meio
Fundo:Reação Ácida, amarelado no meio
Gas:Reação Positiva
H2S: Negativo, sem escurecimento do meio

Organismo:Klebisiella pneumoniae ATCC 13883 (00097*)
Inoculação:50-100
Crescimento:Exuberante
Inclinação: Reação Ácida, amarelado no meio
Fundo:Reação Ácida, amarelado no meio
Gas:Reação Positiva
H2S: Negativo, sem escurecimento do meio

Organismo:Proteus vulgaris ATCC 13315
Inoculação:50-100
Crescimento:Exuberante
Inclinação:Reação Alcalina, cor vermelho no meio
Fundo:Reação Ácida, amarelado no meio
Gas:Reação Negativa
H2S:Positiva, escurecimento do meio

Organismo:Salmonella Paratyphi A ATCC 9150
Inoculação:50-100
Crescimento:Exuberante
Inclinação:Reação Alcalina, cor vermelho no meio
Fundo:Reação Ácida, amarelado no meio
Gas:Reação Positiva
H2S:Negativo, sem escurecimento do meio

Organismo:Salmonella Typhi ATCC 6539
Inoculação:50-100
Crescimento:Exuberante
Inclinação:Reação Alcalina, cor vermelho no meio
Fundo:Reação Ácida, amarelado no meio
Gas:Reação Negativa
H2S:Positiva, escurecimento do meio

Organismo: Salmonella Typhimurium ATCC 14028 (00031*)
Inoculação:50-100
Crescimento:Exuberante
Inclinação:Reação Alcalina, cor vermelho no meio
Fundo:Reação Ácida, amarelado no meio
Gas:Reação Negativa
H2S:Positiva, escurecimento do meio

Organismo:Shigella flexneri ATCC 12022 (00126*)
Inoculação:50-100
Crescimento:Exuberante
Inclinação:Reação Alcalina, cor vermelho no meio
Fundo:Reação Ácida, amarelado no meio
Gas:Reação Negativa
H2S:Negativa, sem escurecimento do meio

Organismo:Escherichia coli ATCC 8739 (00012*)
Inoculação:50-100
Crescimento:Exuberante
Inclinação:Reação Ácida, amarelado no meio
Fundo:Reação Ácida, amarelado no meio
Gas:Reação Positiva
H2S:Negativa, sem escurecimento do meio

Organismo:Escherichia coli NCTC 9002
Inoculação:50-100
Crescimento:Exuberante
Inclinação:Reação Ácida, amarelado no meio
Fundo:Reação Ácida, amarelado no meio
Gas:Reação Positiva
H2S:Negativa, sem escurecimento do meio

Organismo:Klebisiella pneumoniae ATCC 10031
Inoculação:50-100
Crescimento:Exuberante
Inclinação:Reação Ácida, amarelado no meio
Fundo:Reação Ácida, amarelado no meio
Gas:Reação Positiva
H2S:Negativa, sem escurecimento do meio

Armazenamento e prazo de validade
Armazenar entre 10-30°C em um recipiente bem fechado e o meio preparado a 2-8ºC. Use antes da data de validade no rótulo. Na abertura, o produto deve ser adequadamente armazenado seco, depois de fechar bem o frasco para evitar formação de caroços devido à natureza higroscópica do produto. O armazenamento inadequado do produto pode levar à formação de caroços. Armazenar em local seco área ventilada protegida de temperaturas extremas e fontes de ignição. Feche o recipiente firmemente após o uso. Usar antes do prazo de validade no rótulo. O desempenho do produto é melhor se usado dentro do prazo de validade indicado.

Descarte
O usuário deve garantir o descarte seguro por autoclave e / ou incineração de preparações usadas ou não utilizáveis deste produto. Segue procedimentos laboratoriais estabelecidos na eliminação de materiais infecciosos e materiais que entram em contato com a amostra deve ser descontaminada e descartada de acordo com as técnicas laboratoriais atuais (8,9).

Referências
1. Sulkin E.S. e Willett J.C., 1940, J. Lab. Clin. Med. 25: 649.
2. Hajna A.A., 1945, J. Bacteriol, 49: 516.
3. Salfinger Y. e Tortorello M.L. Quinta (Ed.), 2001, Compêndio de Métodos para o Exame Microbiológico de Alimentos, 5a Ed., American Public Health Association, Washington, D.C.
4. Wehr H. M. e Frank J. H., 2004, Métodos Padrão para o Exame Microbiológico de Produtos Lácteos, 17ª Ed., APHA Inc., Washington, D.C.
5. Finegold S. M. e Baron E. J., 1986, Bailey e Scotts Diagnostic Microbiology, 7ª Ed., The C.V. Mosby Co., St. Louis.
6. Baird R.B., Eaton A.D. e Rice E.W., (Eds.), 2015, Métodos padrão para o exame de água e águas residuais, 23a ed., APHA, Washington, D.C.
7. MacFaddin J., 1985, Media para Isolamento-Cultivo-Identificação-Manutenção de Bactérias Médicas, vol. 1, Williams e Wilkins, Baltimore.
8. Isenberg, H.D. Procedimentos Clínicos de Microbiologia. 2ª Edição.
9. Jorgensen, J. H., Pfaller, M.A., Carroll, K.C., Funke, G., Landry, M. L., Richter, S. S. e Warnock., D.W. (2015). Manual de Microbiologia Clínica, 11ª Edição. Vol. 1