Agar Cromogenico E.Coli Coliformes (Cca) Iso 9308-1 500G AGC-8023 Himedia

AGAR CROMOGENICO E.COLI COLIFORMES (CCA) ISO 9308-1 500G AGC-8023 HIMEDIA

AGC-8023 - ÁGAR CROMOGÊNICO COLIFORMES(CCA)- M1991I

USO PRETENDIDO

• Recomendado para a detecção de Escherichia coli e coliformes em amostras de água. Os critérios de composição e desempenho deste meio estão de acordo com as especificações estabelecidas na ISO 9308-1: 2014. Também pode ser usado para amostras clínicas.

COMPOSIÇÃO 

• Ingredientes (g/L)
• Triptona#: 1.000
• Extrato de levedura: 2.000
• Cloreto de sódio: 5.000
• Dihidrogenofosfato de sódio, 2H2O: 2.200
• Hidrogenofosfato Dissódico: 2.700
• Piruvato de sódio: 1.000
• Sorbitol: 1.000
• Triptofano: 1.000
• Tergitol-7: 0.150
• 6-cloro-3-indoxil ?-D-galactopiranosídeo: 0.200
• Ácido 5-bromo-4-cloro-3-indoxil- B-D-glucurônico: 0.100
• sal de amônio de ciclohexamina, monohidrato IPTG (isopropil-B-D-tiogalactopiranosídeo): 0.100
• Ágar: 15.000
• pH final (a 25°C): 6.8 ±0.2
• Fórmula ajustada, padronizada para se adequar aos parâmetros de desempenho
• Digestão enzimática de caseína

INSTRUÇÕES

• Suspenda 30,92g (o peso equivalente de meio desidratado por litro) em 1000 mL de água purificada/destilada. Aqueça até a fervura para dissolver o meio completamente. NÃO AUTOCLAVAR. NÃO SUPERAQUECER. Esfriar de 45°C a 50°C. Misture bem e despeje em placas de Petri estéreis.

PRINCÍPIO E INTERPRETAÇÃO

• O Ágar Cromogênico HiCrome? é um meio seletivo recomendado para a detecção simultânea de Escherichia coli e coliformes totais em amostras de água (4). O meio contém três substratos cromogênicos. A enzima ß-D-galactosidase produzida pelos coliformes cliva o 6-cloro-3-indoxi I-?-D-galactopiranosídeo para formar colônias da cor rosa a vermelho (2). A enzima ß-D-glucuronidase produzida pela E. coli cliva o ácido 5-bromo-4 cloro-3-indoxi I-?-D-glucurônico (2). E. coli dá colônias de cor azul escuro a violeta devido à clivagem de ambos os cromógenos. A presença do terceiro cromógeno IPTG aumenta a reação da cor. A adição de L-triptofano melhora a reação do indol, aumentando assim a confiabilidade da detecção.
• Triptona, piruvato de sódio e sorbitol fornecem substâncias nitrogenadas, carboidratos fermentáveis e outros nutrientes de crescimento essenciais para os organismos. Os fosfatos tamponam o meio. A formulação do meio ajuda até mesmo os coliformes com lesão subletal a se recuperar e crescer rapidamente. Tergitol-7 inibe bactérias gram-positivas, bem como algumas bactérias gram-negativas, exceto coliformes (2).
• O meio é inoculado pela técnica de semeadura em placa Pour Plate (derramamento) ou espalhando a amostra na superfície do meio revestido. A técnica de filtro de membrana também pode ser usada. Para confirmar E. coli, adicione uma gota do reagente de Kovacs na colônia azul escura a violeta. A formação da cor vermelho cereja indica uma reação positiva.

TIPO DE ESPÉCIME

• Amostras clínicas - Urina;
• Amostras água - água e águas residuais.

COLETA E MANUSEIO DE AMOSTRAS

• Para amostras clínicas, seguir as técnicas adequadas de coleta das amostras, processando conforme as diretrizes (3,4). Para amostras de água, siga as técnicas apropriadas para coleta de amostra, processando de acordo com as diretrizes e padrões locais (1). Após o uso, os materiais contaminados devem ser esterilizados em autoclave antes de serem descartados.

AVISO E PRECAUÇÕES

• Uso para diagnóstico In Vitro. Leia o rótulo antes de abrir o recipiente. Use luvas de proteção / roupas de proteção / proteção de olhos / proteção facial. Siga as boas práticas de laboratório microbiológico ao manusear amostras e cultura. As precauções padrão de acordo com as diretrizes estabelecidas devem ser seguidas durante o manuseio de amostras clínicas. As diretrizes de segurança podem ser referidas em fichas de dados de segurança individuais.

LIMITAÇÕES

• 1. Outros testes bioquímicos são necesarios para identificação do microrganismo.
• 2. Podem ser observadas certas variações de cor

CONTROLE DE QUALIDADE

• Aparência: Pó homogêneo de fluxo livre de creme a amarelo
• Gelificação: Firme, comparável com o gel de ágar a 1,5%
• Cor e clareza do meio preparado: Formas de gel amarelo claro a ligeiramente opalescente em placas de Petri
• Reação: Reação de 3.09% p/v em solução aquosa a 25°C. pH: 6.8 ±0.2
• pH: 6.60 - 7.00

RESOSTA CULTURAL

• Características culturais observadas após uma incubação de 34°C a 38°C por 24 horas.

Organismo

• Citrobacter freundii ATCC 43864 (00006)*
• Inóculo(UFC): 50-100
• Crescimento: Exuberante
• Recuperação: >=70%
• Cor da colônia: Rosa claro a rosa

Organismo 

• Klebsiella aerogenes ATCC 13048 (00175)*
• Inóculo(UFC): 50-100
• Crescimento: Exuberante
• Recuperação: >=70%
• Cor da colônia: Rosa claro a rosa

Organismo

• Escherichia coli ATCC 25922 (00013)*
• Inóculo(UFC): 50-100
• Crescimento: Exuberante
• Recuperação: >=70%
• Cor da colônia: Azul escuro a violeta

Organismo

• Escherichia coli ATCC 8739 (00012)*
• Inóculo(UFC): 50-100
• Crescimento: Exuberante
• Recuperação: >=70%
• Cor da colônia: Azul escuro a violeta

Organismo

• Enterococcus faecalis ATCC 19433 (00009)*
• Inóculo(UFC): >=10^4
• Crescimento: Inibido
• Recuperação: 0
• Cor da colônia: -

Organismo

• Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 (00024)*
• Inóculo(UFC): 50-100
• Crescimento: Exuberante
• Recuperação: >=70%
• Cor da colônia: Incolor

Chave: Números WDCM correspondentes tanto na placa quanto na membrana. Anteriormente conhecido como Enterobacter aerogenes.

ARMAZENAMENTO E VIDA ÚTIL

• Armazenar entre 15°C e 25°C em um recipiente bem fechado e o meio preparado entre 2°C e 8° C. Use antes da data de validade no rótulo. Na abertura, o produto deve ser devidamente armazenado seco, após tampar bem o frasco para evitar formação de grumos devido à natureza higroscópica do produto. O armazenamento inadequado do produto pode levar à formação de caroços. Armazenar em área ventilada e seca protegida de extremos de temperatura e fontes de ignição. Selar o recipiente hermeticamente depois de usar. O desempenho do produto é melhor se usado dentro do período de validade declarado.

DISPOSIÇÃO

• O usuário deve garantir o descarte seguro por autoclavagem e/ou incineração das preparações usadas ou inutilizáveis deste produto. Seguir procedimentos laboratoriais estabelecidos para o descarte de materiais infecciosos e materiais que entram em contato com a amostra devem ser descontaminados e descartados de acordo com as técnicas laboratoriais vigentes (3,4).

REFERÊNCIAS

• 1. Baird R.B., Eaton A.D., and Rice E.W., (Eds.), 2015, Standard Methods for the Examination of Water and
• Wastewater, 23rd ed., APHA, Washington, D.C.
• 2. International Organization for Standardization. Water quality: Enumeration of E.coli and coliform bacteria. Part IMembrane filtration methods for bacteria with low bacterial background flora. ISO 9308-1:2014.
• 3. Isenberg, H.D. Clinical Microbiology Procedures Handbook 2nd Edition.
• 4. Jorgensen, J.H., Pfaller , M.A., Carroll, K.C., Funke, G., Landry, M.L., Richter, S.S and Warnock., D.W.(2015)
• Manual of Clinical Microbiology, 11th Edition. Vol. 1.
• 5. Kilian M. and Bülow P., 1976, Acta. Pathol. Microbiol. Scand Sect. B, 84:245.
• 6. Manafi M. and Kneifel W., 1989, Zentralbl. Hyg., 189:225.